產(chǎn)品名稱：Zymo EZ-96 DNA甲基化試劑盒-gold(D5008)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號：D5008

產(chǎn)品品牌：Zymo

產(chǎn)品簡介：

DNA甲基化是原核生物和真核生物中自然發(fā)生的事件。在原核生物中，DNA甲基化提供了一種保護(hù)宿主DNA免受限制性內(nèi)切酶消化的方法，該內(nèi)切酶旨在消除外來DNA，而在高等真核生物中，DNA甲基化在基因表達(dá)的調(diào)節(jié)/控制中發(fā)揮作用。研究表明，異常DNA甲基化在癌癥中是一種廣泛的現(xiàn)象，可能是致癌過程中最早發(fā)生的變化之一。DNA甲基化也被證明在基因印跡、胚胎發(fā)育、X染色體基因沉默和細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮著核心作用。在許多植物和動物中，DNA甲基化包括通過甲基轉(zhuǎn)移酶在胞嘧啶環(huán)的第五個(gè)碳位置添加甲基。哺乳動物的大多數(shù)DNA甲基化發(fā)生在5'-CpG-3'二核苷酸中，但也存在其他甲基化模式。事實(shí)上，哺乳動物基因組中約80%的5'-CpG-3'二核苷酸被發(fā)現(xiàn)是甲基化的，而20%未甲基化的核苷酸大多位于啟動子內(nèi)或基因的第一外顯子中。

EZ-96 DNA 甲基化-Gold 試劑盒能夠在不到3個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)將未被甲基化的胞嘧啶大規(guī)模（96孔離心板）轉(zhuǎn)化成尿嘧啶。精心設(shè)計(jì)的亞硫酸氫鹽化學(xué)方法結(jié)合了DNA的熱變性和亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，以縮短孵育時(shí)間，并確保轉(zhuǎn)化率高達(dá)99%以上。通過提取的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化DNA，可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而為下游分析提供理想的選擇，包括核酸內(nèi)切酶消化、測序和微陣列等技術(shù)。

樣品處理：

1.將130µl的CT轉(zhuǎn)換試劑添加到轉(zhuǎn)換板中的每個(gè)DNA樣品的20µl*中。如果DNA樣品的體積小于20µl，則用水彌補(bǔ)差異。通過上下移液混合樣品。

2.用提供的薄膜密封板。將轉(zhuǎn)換板轉(zhuǎn)移到熱循環(huán)儀上，并執(zhí)行以下步驟：

（1）98°C，持續(xù)10分鐘

（2）64°C，持續(xù)2.5小時(shí)

（3）4°C儲存長達(dá)20小時(shí)

注：4°C儲存步驟是可選的。對于某些樣本，替代參數(shù)可能會產(chǎn)生更好的結(jié)果（見附錄）。如果您一直在使用該試劑盒，并在與上述不同的反應(yīng)條件下獲得了良好的結(jié)果，您可以繼續(xù)使用相同的條件。

3.將600µl M-結(jié)合緩沖液添加到安裝在收集板上的Zymo Spin™I-96結(jié)合板的孔中。

注：結(jié)合板每孔的容量為1.1 ml。收集板每孔容量為800µl。必要時(shí)清空收集板，以防止污染。

4.將樣品從轉(zhuǎn)換板（步驟2）轉(zhuǎn)移到ZymoSpin™I-96結(jié)合板的孔中。通過上下移液混合。

5.以≥3000 x g（最大5000 x g）離心5分鐘。丟棄流通管。

6.向板的每個(gè)孔中加入400µl的M-Wash緩沖液。以≥3000 x g離心5分鐘。

7.向每個(gè)孔中加入200µl M-脫硫緩沖液，并使板在室溫（20-30°C）下靜置15-20分鐘。培養(yǎng)后，以≥3000 x g離心5分鐘。丟棄流通管。

產(chǎn)品選購：

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司，現(xiàn)貨供應(yīng)Zymo EZ-96 DNA甲基化試劑盒-gold(D5008)，歡迎選購！