Elabscience葉酸/維生素B9(FA/VB9)ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中FA/VB9濃度。那么你知道Elabscience葉酸/維生素B9(FA/VB9)ELISA試劑盒怎么用嗎？讓我們一起來看看吧！

一、檢測前準備工作

1. 提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫(18-25℃)。如果試劑盒需分 多次使用，請僅取出本次實驗所需的酶標板條和試劑，剩余板條和試劑需 按照zhi定條件保存。

2. 洗滌液：將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:24)。提示：從冰箱中取出的濃縮洗 滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶wan全溶解后 再配制洗滌液。當日使用。

3. 標準品工作液：將標準品于10000×g離心1分鐘，加入標準品&樣品稀釋液1 mL至凍干標準品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，輕輕混勻，避免起泡，配成100 ng/mL的標準品工作液(或加入1mL標準品&樣品稀釋液后，靜置1-2分鐘，用低速渦旋儀充分混勻。可通過低速離心去除渦旋過程中產(chǎn)生的氣泡)。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋。建議配制 成以下濃度：100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0 ng/mL。倍比稀釋方法：取7支EP管，每管中加入500 μL標準品&樣品稀釋液，從100 ng/mL的標準品工作液中吸取500 μL到第一支EP管中混勻配成50 ng/mL的標準品工作液，按此步驟往后依次吸取混勻。如下圖。提示：最后一管直接作為空白孔，不需要再從倒數(shù)第二管中吸取液體。倍比稀釋的標準品工作液需要現(xiàn)配現(xiàn)用。

4. 生物素化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量(以50 μL/孔計算)，實 際配制時應多配制100-200 μL。使用前15分鐘，將濃縮生物素化抗體于 800×g離心1分鐘，以生物素化抗體稀釋液將100×濃縮生物素化抗體稀釋成 1×工作濃度(例如：10 μL濃縮液+990 μL稀釋液)。現(xiàn)配現(xiàn)用。

5. HRP酶結(jié)合物工作液：HRP酶結(jié)合物為HRP酶結(jié)合親和素。實驗前計算當次實驗所需用量(以100 μL/孔計算)，實際配制時應多配制100-200 μL。使用前15分鐘，將濃縮HRP酶結(jié)合物于800×g離1分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液將100×濃縮HRP酶結(jié)合物稀釋成1×工作濃度(例如：10 μL濃縮液+990 μL稀釋液)。現(xiàn)配現(xiàn)用。

二、操作步驟：

1. 分別設定標準孔、空白孔和樣本孔。標準孔加入50 μL 倍比稀釋的標準品，空白孔加入50μL標準品&樣本稀釋液，其余孔加入50 μL 待測樣本(建議所有的待檢樣本和標準品在檢測中設立復孔；建議通過預實驗或咨詢技術(shù) 支持確定待檢樣本的稀釋倍數(shù))。立即每孔加入配好的生物素化抗體工作液50 μL。給酶標板覆膜，37℃孵育45分鐘。提示：加樣時將樣品加于酶 標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，避免產(chǎn)生氣泡。加樣時間宜控制在10分鐘內(nèi)。

2. 甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干。每孔加洗滌液350 μL，浸泡1分鐘，吸去或甩掉酶標板內(nèi)的液體，拍干。重復此洗板步驟3次。提示：此處與其他洗板步驟都可使用洗板機。洗板完成后請立即進行下步操作，不要讓微孔板干燥。

3. 每孔加 HRP 酶結(jié)合物工作液100 μL，酶標板加上覆膜，37℃溫育30分鐘。 4. 甩盡孔內(nèi)液體，洗板5次，方法同步驟 2。

5. 每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，酶標板加上覆膜，37℃避光孵育 15 分鐘左右。提示：根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時(前4個顯色孔出現(xiàn)明顯藍色梯度)，即可終止。提前15分鐘打開酶標儀預熱。

6. 每孔加終止液50 μL，終止反應。提示：終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。

7. 立即用酶標儀在450 nm波長測量各孔的光密度(OD 值)。

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